产品货号：
MT0137
中文名称：
探针法荧光定量PCR冻干试剂盒(UNG酶)
英文名称：
Lyophilized Fast DNA TaqMan PCR Kit(UNG)
产品规格：
20μL×200T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒是采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），其中冻干的TaqMan PCR Reagent将热启动Fast Taq DNA聚合酶、dNTP/dUTP、热敏UNG等做成冻干品试剂，制品性能稳定，可长期保存。当加入2×TaqMan Buffer溶解后，试剂变为常规TaqMan PCR单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、cDNA或DNA模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适合各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型。
本制品中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。
由于PCR对核酸的扩增效率极高，在诊断PCR实验中，非常容易造成移液器、台面、PCR仪、空气等气溶胶污染。当实验环境被污染后，会导致阴性样本的假阳性结果。本试剂中，将dNTP中的dTTP全部更换为dUTP，从而使得扩增后的PCR产物中包含dU碱基。在随后的实验中，含有气溶胶污染的dU PCR产物，将被本试剂中的UNG糖基化酶降解，从而去除了气溶胶的污染效应，本试剂中的UNG酶在37℃孵育2分钟，即可消除高达10万个Copy的核酸污染物。因此，本制品是诊断定量PCR检测的最佳试剂。
- 热启动酶采用专有的修饰方式，30s热启动。
- 引入UNG，可高效消除气溶胶污染。
- 单组份预混液，使用方便快捷。
- 冻干制品，性能极其稳定，适合长期保存。
- 高灵敏度，可检测低丰度基因。
- 适用于所有实时定量PCR仪器
| 组分 | 规格 |
| 冻干DNA TaqMan PCR Reagent(UNG) | 2瓶 |
| 2×TaqMan PCR Buffer 7 | 1mL×2 |
保存：室温，有效期1年。
以pUC57质粒为模板，将该模板进行8个4倍稀释，第8个稀释梯度中模板拷贝数为10copy/μL，用DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)进行扩增检测，每个反应体系加模板2μL，如图所示。
A：本制品在宽广的模板量区间内具有卓越的线性关系：扩增效率97.5%，R2 =0.9995。
B：测试UNG去除DNA污染的能力，向反应体系中加入105copy的含dUTP的PCR产物，分别用普通冻干DNA TaqMan PCR Reagent(B1)和DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)(B2)做定量PCR。从图中可以看出：UNG可很好的去除105copy的气溶胶污染。
C：图A扩增的标准曲线。
- 溶解冻干制品
每瓶冻干DNA TaqMan PCR Reagent(UNG)中加入1mL TaqMan PCR Buffer7溶解冻干品，溶解后的制品为2倍浓度的TaqMan PCR Mix试剂（2×TaqMan PCR Mix）。溶解后的剩余试剂可置于-20℃保存，下次实验融化后直接使用即可。 - 配制反应体系
按照如下组分配制20μL PCR反应体系成分 用量 终浓度 2×TaqMan PCR Mix 10μL 1× PCR Forward Primer (10μM) 0.4μL 0.2μM PCR Reverse Primer (10μM) 0.4μL 0.2μM TaqMan Probe (10μM) 0.4μL 0.2μM cDNA或DNA模板 0.5～2μL ddH2O 至20μL - Real-Time PCR反应程序
温度 时间 循环数 说明 37℃ 2min 1 消化污染物 95℃ 30s 1 热启动反应 95℃ 5s 40 PCR循环 60℃ 20s
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